shRNA表達載體構建

服務簡介：

作為RNA干擾實驗的第一步，靶位點的選擇以及相應的shRNA表達載體的構建，是整個RNA干擾實驗的重中之重。靶位點選擇恰當，shRNA干擾效率高，整個RNA干擾實驗就能夠事半功倍，否則，就會做許多無用功。

目前，有許多免費軟件或網站能夠提供靶位點選擇及shRNA序列設計，但是這種免費軟件算法落后，設計出的shRNA序列有效率只有25%-30% 左右。與之相對應的是一些商業化軟件，或者現成的商業化shRNA庫，由于其算法先進、設計原則合理，其提供的shRNA序列的有效率通常能達到75%以 上，即可以達到每四條shRNA中有三條有效。所以，如果采用商業化軟件來設計shRNA，或者直接購買現成的商業化shRNA庫，將能使您在整個RNA 干擾實驗之始便占得先機。

基于以上，贏潤生物在國內率先引進代表RNA干擾領域全球頂尖水準的TRC (The RNAi, RNA干擾協會)開發的TRC shRNA庫。該庫針對人、小鼠、大鼠等數萬個基因，每個基因提供3-5 條shRNA (己構建至載體上) ，總數達五萬多條，且數量還在不斷增加。經過大規模實驗驗證，其中超過75%均為有效shRNA ，其干擾效率均大于70%.

以此shRNA庫為基礎，針對每個基因，我們可為您提供3-5條高質量的shRNA序列，并為您構建到sRNA真核表達載體上。由于此數據庫中的 shRNA序列有效性超過75% ，即理論上來說，每一套shRNA克隆中，必定至少有一條shRNA的干擾效率超過70% 。所以，您再也不必擔心選擇的shRNA序列沒有干擾效果，您再也不用費時費力費心地去一遍遍地篩選有效的shRNA序列。選用此shRNA庫，您會發 現，原來RNA干擾實驗會如此簡單!

您只需告訴我們您需要干擾的目的基因，我們就會為您從數據庫中調取相應的shRNA序列信息，然后，您可以選擇合適的shRNA達系統來表達shRNA ，進行RNA干擾實驗。

TIPS : TRC及TRC shRNA庫

TRC (The RNAi ，RNAA干擾協會)是由麻省理工學院和哈佛大學牽頭建立的合作機構，包括Massachusetts General Hospital 、Harvard Med school 、Dana Farber Cancer Inst 、The Broad Institute 、Whitehead lnstitute 、MlT、Academica Sinica (Taiwan)和另外5個國際性組織，代表著RNA干擾領域的全球最頂尖水平。該組織計劃在3年內構建數量達15000個人類基因和15000個小鼠基 因的shRNA文庫。第1版的TRC shRNA文庫包括35000 shRNA克隆(其中人類基因有5300個，小鼠基因有2200個) ，其它新構建的克隆每個季度會陸續公布。

贏潤生物shRNA表達系統

TRC shRNA克隆套裝中的原裝進口質粒，由于不帶熒光標記，使得質粒轉染細胞后，無法確定轉染效率。針對這一不足，贏潤生物將自己的shRNA表達系統與 TRC shRNA庫相結合，為客戶提供更貼心、更靈活，且RNA干擾效率絲毫不減的shRNA表達質粒產品。也就是說， shRNA序列依然參考TRC shRNA庫中的數據，而承載這些shRNA片段的載體，則采用多種啟動子、多種熒光標記可供選擇的贏潤生物shRNA表達系統。

本公司目前提供的shRNA真核表達載體，共有hU6 、mU6 、hH1， h7SK四種pol Ⅲ型啟動子可供選擇，可選擇攜帶熒光(包括綠色熒光、紅色熒光)或不攜帶熒光。除此之外，本公司還提供mirshRNA真核表達載體，可以進行 mirshRNA真核表達載體構建。

構建的shRNA真核表達載體，既可以當作普通的shRNA表達載體使用，也可以用來包裝腺病毒、慢病毒或腺相關病毒。如果您的目的細胞質粒轉染效 率較高(建議大于70%) ，則您可以直接使用帶有目的shRNA的pYr系列質粒進行RNA干擾實驗。而如果您的目的細胞質粒轉染效率較低，則可直接以這些載體為基礎，包裝腺病 毒、慢病毒或腺相關病毒，然后再用病毒感染目的細胞。利用病毒的高感染效率、高表達效率，更好地進行RNA干擾研究實驗。

既可以當普通的shRNA真核表達載體使用，同時又可以拿來包裝腺病毒、慢病毒或腺相關病毒，花一份錢，買兩樣東西！而且其干擾有效性、干擾效率大 部分都超過70%！這么超值、這么優秀、性價比如此高的shRNA產品，您還等什么呢？趕緊撥打我們的電話，或者通過QQ 、Email聯系我們吧，您只需報上目的基因的NCBI序列號， 后面的事，我們替您完成！

贏潤生物shRNA表達載體列表

選用贏潤生物shRNA表達系統，具有如下優點:

1. shRNA序列數據來自國外成熟shRNA數據庫，質量有保證。RNA干擾效率的高低主要取決于靶位點的選擇和shRNA序列的設計，由于本公司所采用的shRNA序列來自國外成熟shRNA數據庫，算法先進，靶位點成功率高，所以shRNA的干擾成功率非常高；

2. 您可以選擇構建一條或者多條，靈活性高；

3. 多種啟動子，有熒光或無熒光，綠色熒光或紅色熒光等可自由選擇，以更好地配合后續實驗；

4. 載體可作為普通shRNA表達載體使用，亦可作為病毒包裝系統的穿梭載體或表達載體使用，以進行腺病毒、慢病毒或腺相關病毒包裝。

服務價格及周期:

客戶須知:

1. 請事先確定是否需要熒光；

2. 您可以訂購贏潤生物shRNA克隆套裝(己裝載至載體的三條shRNA 、NC對照質粒) ，僅需4000元；

3. 由于小提質粒在轉染細胞時，無論是濃度、純度還是內毒素含量均不是很合格，所以本公司建議您訂購一個"轉染級質粒大提"服務，400元/個，至少 提供轉染級大提質粒100ug.如果您訂購贏潤生物shRNA克隆套裝，且將套裝中的4個質粒均做大提，則大提費用可優惠至250元/個。

服務承諾:

1. 本公司承諾，如客戶訂購針對某個基因的贏潤生物shRNA克隆套裝（3-5條shRNA）， 則本公司保證其中至少有一條shRNA是有效的，其干擾效率大于70% 。在目的細胞轉染效率大于80% ，且客戶檢測shRNA有效性的實驗方法恰當、操作正確的前提下，如果沒有達到上述標準，本公司將免費為客戶重新設計和構建兩條shRNA 。如果五條shRNA都無效，則本公司將全額退還客戶己付款項；

2. 如果shRNA序列由客戶自己設計，本公司只負責成功構建shRNA表達載體，對其中shRNA的干擾有效性不做任何保證；

3. 如果客戶訂購的shRNA條數在三條以下，本公司不保證設計的shRNA一定有效；

4. 如果客戶需委托本公司完成shRNA的有效性驗證實驗，則需加收驗證部分的實驗費用